Bộ kiểm tra sữa ELISA nhanh Melamine để phát hiện sữa 96Wells / Kit ISO9001

Bộ xét nghiệm ELISA Melamine để phát hiện sữa 96Wells/Kit ISO9001

 

1. Nguyên tắc

Bộ xét nghiệm này dựa trên xét nghiệm miễn dịch enzym cạnh tranh gián tiếp để phát hiện Melamine trong mẫu.Kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng.Melamine trong mẫu và các kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng cạnh tranh để tạo ra các kháng thể chống Melamine.Sau khi thêm chất liên hợp enzyme, cơ chất TMB được thêm vào để tạo màu.Giá trị mật độ quang (OD) của mẫu thử nghiệm có mối tương quan nghịch với nồng độ Melamine trong mẫu.Giá trị này được so sánh với đường chuẩn và sau đó thu được nồng độ Melamine.

 

 

2.Bộ kiểm tra sữaCác thành phần

1	Dải giếng vi thể	12 dải với 8 có thể tháo rời mỗi giếng
2	Dung dịch chuẩn 6× (mỗi dung dịch 1 mL)	0ppb	0,5ppb
		1,5ppb	4,5ppb
		13,5ppb	40,5ppb
3	Dung dịch chuẩn	1 phần triệu	1ml
4	liên hợp enzym	7ml	nắp màu đỏ
5	Giải pháp làm việc kháng thể	7ml	mũ lưỡi trai màu xanh
6	chất nền A	7ml	mũ lưỡi trai màu trắng
7	Chất nềnB	7ml	mũ đen
số 8	Giải pháp dừng	7ml	mũ vàng
9	Chiết xuất mẫu gấp 10 lần dung dịch A	50ml	nắp trong suốt
10	Dung dịch B chiết mẫu 20 lần	50ml	mũ lưỡi trai màu xanh
11	Đệm rửa đậm đặc 20×	15ml	mũ lưỡi trai màu trắng

 

3. Thông số kỹ thuật

Độ nhạy: 0,5ppb

Nhiệt độ lồng ấp: 25℃

Thời gian ủ: 30 phút～15 phút

Giới hạn phát hiện:

Bơ, kẹo, phô mai 10ppb

Tỷ lệ phản ứng chéo:

Melamin 100%

Tỷ lệ thu hồi:

Bơ 90±25%

Kẹo, phô mai 95±25%

 

4. Vật liệu cần thiết nhưng không được cung cấp

1) Thiết bị: đầu đọc vi bản, máy in, vortex, máy ly tâm, pipet đo, cân bằng (độ nhạy đối ứng là 0,01 g), bể nước 70 ℃;

2) Micropipet: một kênh 20~200 µL, 100~1000 µL;và đa kênh 30～300 μl;

 

5. Tiền xử lý mẫu

Hướng dẫn (Các điểm sau phải được xử lý trước khi xử lý trước)

1) Chỉ có thể sử dụng các mẹo dùng một lần cho các thí nghiệm và các mẹo phải được thay đổi khi sử dụng cho các thuốc thử khác nhau;

2) Trước khi thí nghiệm, từng dụng cụ thí nghiệm phải sạch sẽ, nếu cần thiết phải vệ sinh lại để tránh nhiễm bẩn ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

Chuẩn bị dung dịch

1) Dung dịch chiết mẫu A

Pha loãng dung dịch chiết mẫu 10 lần A với nước khử ion theo tỷ lệ 1:9;

2) Dung dịch B chiết mẫu

Pha loãng dung dịch B chiết mẫu 20x với nước khử ion theo tỷ lệ 1:19.

 

5.1 Bơ

1) Lấy 1 g bơ tươi cho vào ống ly tâm 50 ml, thêm 5 ml Dung dịch chiết mẫu A, ủ ở bể nước 70oC trong 5 phút, vortex và lắc trong 5 phút, ly tâm ở nhiệt độ phòng trên 4000 vòng / phút trong 5 phút;

2) Lấy 50ul chất lỏng ở lớp dưới để phân tích

Độ pha loãng của mẫu: 5

5.2 Kẹo, phô mai

1) Lấy 1 g mẫu tươi cho vào ống ly tâm 50 ml, thêm 5 ml Dung dịch chiết mẫu B, ủ ở bể nước 70oC trong 5 phút, xoáy và lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ trên 4000 vòng / phút ở nhiệt độ phòng trong 5 phút;

2) Lấy 50ul chất lỏng ở lớp dưới để phân tích

Độ pha loãng của mẫu: 5

 

6. Quy trình ELISA

6.1 Hướng dẫn

1 Đưa tất cả thuốc thử và dải giếng vi thể về nhiệt độ phòng (20-25 ℃).

2 Đưa tất cả thuốc thử về 2-8 ℃ ngay sau khi sử dụng.

3 Độ lặp lại của phép phân tích ELISA, ở mức độ lớn, phụ thuộc vào tính nhất quán của quá trình rửa đĩa.Thao tác rửa đĩa đúng cách là điểm mấu chốt trong quy trình ELISA.

4 Để ủ ở nhiệt độ không đổi, tất cả các mẫu và thuốc thử phải tránh tiếp xúc với ánh sáng và mỗi tấm vi mạch phải được niêm phong bằng màng che.

6.2 Quy trình vận hành

1)Đưa bộ xét nghiệm về nhiệt độ phòng (20-25℃) ít nhất 30 phút, lưu ý lắc đều từng thuốc thử trước khi sử dụng;đặt các dải giếng vi thể cần thiết vào khung tấm.Niêm phong lại tấm vi mạch chưa sử dụng, bảo quản ở nhiệt độ 2-8 ℃, không đông lạnh.

2)Chuẩn bị dung dịch: pha loãng 15mL dung dịch đệm rửa đậm đặc 20X với nước khử ion thành 300mL để sử dụng;

3)Đánh số: đánh số các giếng vi mô theo mẫu và dung dịch chuẩn;mỗi mẫu và dung dịch chuẩn phải được thực hiện lặp lại;ghi lại vị trí của chúng.

4)Thêm 50µL mẫu/dung dịch chuẩn vào các giếng trùng lặp riêng biệt, sau đó thêm 50µL enzyme liên hợp, sau đó thêm 50µL dung dịch làm việc kháng thể vào mỗi giếng, lắc kỹ, đậy kín tấm vi mạch bằng màng che và ủ ở 25℃ trong 30 phút;

5)Đổ dung dịch ra khỏi giếng, rửa microplate với dung dịch đệm rửa pha loãng 250 µL/giếng trong 5-6 lần.Mỗi lần ngâm kỹ với dung dịch đệm rửa đã pha loãng từ 15-30 giây rồi vỗ cho khô trên giấy thấm (nếu sau khi vỗ còn bọt khí thì dùng đầu tăm sạch cắt bỏ).

6)Tạo màu: thêm 50µL chất nền A, sau đó thêm 50µL chất nền B vào mỗi giếng.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa thủ công và ủ ở 25 ℃ trong 15 phút trong bóng tối để tạo màu;

7)Cách xác định: thêm 50µL dung dịch dừng vào mỗi giếng.Trộn nhẹ nhàng bằng cách lắc đĩa bằng tay.Đặt bước sóng của đầu đọc vi bản ở 450nm để xác định giá trị OD của mỗi giếng.(Khuyến nghị đọc giá trị OD ở bước sóng kép 450/630nm trong vòng 5 phút).

 

7. Kết quả xét xử

Có hai phương pháp để đánh giá kết quả;cái đầu tiên là phán đoán sơ bộ, trong khi cái thứ hai là xác định định lượng.Lưu ý giá trị OD của mẫu có mối tương quan nghịch với hàm lượng Melamine.

7.1 Xác định định tính

Khoảng nồng độ (ng/mL) có thể thu được từ việc so sánh giá trị OD trung bình của mẫu thử nghiệm với giá trị của dung dịch chuẩn.Giả sử rằng giá trị OD của sampleⅠ là 0,3 và của sampleⅡ là 1,0, giá trị OD của các dung dịch chuẩn là: 2,043 cho 0ppb, 1,604 cho 0,5ppb, 1,101 cho 1,5ppb, 0,512 cho 4,5ppb, 0,161 cho 13,5ppb , 0,055 cho 40,5ppb, theo đó, phạm vi nồng độ của mẫuⅠ là 4,5 đến 13,5ppb và của mẫu Ⅱ là 1,5 đến 4,5ppb.

7.2 Xác định định lượng

Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ tương đương với tỷ lệ phần trăm của giá trị OD trung bình (B) của mẫu thử và dung dịch chuẩn chia cho giá trị OD (B0) của dung dịch chuẩn đầu tiên (chuẩn 0) và sau đó nhân với 100 %, đó là

 

Phần trăm giá trị độ hấp thụ =	b	×100%
	B0

 

B—giá trị OD trung bình (giếng kép) của mẫu thử hoặc dung dịch chuẩn

B0—giá trị OD trung bình của dung dịch chuẩn 0ng/mL

Vẽ đường chuẩn với phần trăm hấp thụ của các dung dịch chuẩn và giá trị bán logarit của các dung dịch chuẩn Melamine (ng/mL) lần lượt là trục Y và trục X.Đọc nồng độ tương ứng của mẫu thử từ đường chuẩn bằng cách kết hợp phần trăm độ hấp thụ của nó vào đường chuẩn.Giá trị thu được sau đó được nhân với hệ số pha loãng tương ứng, cuối cùng thu được nồng độ Melamine trong mẫu.

 

8. Biện pháp phòng ngừa

1)Nhiệt độ phòng dưới 25℃ hoặc nhiệt độ của thuốc thử và mẫu xét nghiệm không được đưa về nhiệt độ phòng (20-25℃) sẽ dẫn đến giá trị OD tiêu chuẩn thấp hơn.

2)Độ khô của tấm vi mạch trong quá trình rửa sẽ đi kèm với các tình huống bao gồm các đường cong tiêu chuẩn phi tuyến tính và khả năng tái tạo không mong muốn;Vì vậy, hãy tiếp tục bước tiếp theo ngay sau khi giặt.

3)Trộn đều, nếu không sẽ có độ lặp lại không mong muốn.

4)Dung dịch dừng là dung dịch axit sunfuric 2 M, tránh tiếp xúc với da.

5)Không sử dụng bộ quá hạn sử dụng.Việc sử dụng thuốc thử pha loãng hoặc tạp nhiễm từ bộ dụng cụ sẽ dẫn đến những thay đổi về độ nhạy và giá trị OD phát hiện.Không trao đổi thuốc thử từ các bộ dụng cụ có số lô khác nhau để sử dụng.

6)Đặt tấm vi mạch chưa sử dụng vào túi tự động niêm phong để niêm phong lại.Chất chuẩn và chất tạo màu không màu nhạy cảm với ánh sáng và do đó chúng không thể tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng.

7)Loại bỏ dung dịch tạo màu với bất kỳ màu nào cho thấy sự thoái hóa của dung dịch này.Giá trị phát hiện của dung dịch tiêu chuẩn 1(0 ppb) nhỏ hơn 0,5 cho thấy sự thoái hóa của nó.

số 8)Nhiệt độ phản ứng tối ưu là 25 ℃ và nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp sẽ dẫn đến những thay đổi về độ nhạy phát hiện và giá trị OD.

 

9. Bảo quản và hạn sử dụng

Bảo quản: bảo quản ở 2-8℃, không đông lạnh.

Hạn sử dụng: 12 tháng;ngày sản xuất có trên hộp

Lưu ý: Nếu gói hút chân không của tấm vi mạch bị rò rỉ, nó vẫn còn giá trị sử dụng, không ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm, hãy thoải mái sử dụng.

 

 

Q1: Bạn sẽ mất bao lâu để vận chuyển?
A1: Thường vận chuyển trong vòng 7 ngày làm việc.

 

Q2: Bạn có hỗ trợ OEM/ODM không?
A2: có thể được hỗ trợ.Chúng tôi có thể tùy chỉnh theo nhu cầu cụ thể của bạn và số lượng cụ thể.

 

Câu 3: Nhà máy của bạn hoạt động như thế nào về mặt kiểm soát chất lượng?
A3: Chúng tôi có chứng nhận ISO9001 và chứng nhận ISO13485, cho đến nay tất cả quy trình sản xuất, chúng tôi có các quy tắc tiêu chuẩn, chúng tôi tuân thủ các hành vi và luật có liên quan của chính phủ.

 

Q4: Dịch vụ sau bán hàng có được đảm bảo không?
A4: Chúng tôi cung cấp dịch vụ hậu mãi kỹ thuật trực tuyến chuyên nghiệp.Nếu sản phẩm bị lỗi trong quá trình thử nghiệm, chúng tôi có thể cung cấp
hướng dẫn trực tiếp qua điện thoại, video và các hình thức khác.

 

Q5: Số lượng đặt hàng tối thiểu của bạn là bao nhiêu?
A5: 1Bộ.

 

Q6: Phương thức vận chuyển là gì?
A6: Nó có thể được vận chuyển bằng chuyển phát nhanh (FEDEX, UPS, DHL, EMS, v.v.) hoặc bằng đường hàng không và đường bộ. Vui lòng xác nhận với chúng tôi trước khi đặt hàng.