Nitrofuran AOZ Kit Kiểm tra ELISA cho Mật ong tôm cá Độ nhạy 0,01ppb 96Wells / Kit

Bộ thử nghiệm Nitrofuran AOZ ELISA cho Mật ong tôm cá Độ nhạy 0,01ppb 96Wells / Kit

 

1. Nguyên tắc

Điều này fbộ kiểm tra nhanh an toàn ooddựa trên xét nghiệm miễn dịch enzym cạnh tranh để phát hiện AOZ trong mẫu.Các kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng.AOZ trong mẫu và các kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng cạnh tranh với các kháng thể chống AOZ.Sau khi bổ sung liên hợp enzyme, chất nền TMB được thêm vào để tạo màu.Giá trị mật độ quang học (OD) của mẫu có mối tương quan nghịch với AOZ trong đó.Giá trị này được so sánh với đường chuẩn và sau đó thu được nồng độ AOZ.

2. Thành phần

1	Dải giếng siêu nhỏ	12 dải với 8 có thể tháo rời giếng mỗi
2	Dung dịch tiêu chuẩn 6 × (mỗi 1mL)	0ppb	0,01ppb
		0,03ppb	0,09ppb
		0,27ppb	0,81ppb
3	Liên hợp enzyme	7ml	nắp màu đỏ
4	Giải pháp làm việc kháng thể	7ml	mũ lưỡi trai màu xanh
5	Chất nền A	7ml	mũ lưỡi trai màu trắng
6	Chất nềnB	7ml	nắp đen
7	Giải pháp dừng	7ml	nắp vàng
số 8	20 × đệm giặt đậm đặc	40ml	mũ lưỡi trai màu trắng
9	2 lần dung dịch hòa tan cô đặc	50ml	nắp trong suốt
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	nắp đen

 

3. Thông số kỹ thuật

Độ nhạy: 0,01ppb

Nhiệt độ ủ: 25 ℃

Thời gian ủ: 30 phút ～ 15 phút

Giới hạn phát hiện

Mô, trứng, mật ong: 0,05ppb

Tỷ lệ phản ứng chéo

AOZ 100%

AMOZ <0,1%

AHD <0,1%

SEM <0,1%

Tỷ lệ thu hồi

Mô, trứng 95 ± 25%

Mật ong 85 ± 23%

 

4. Vật liệu được yêu cầu nhưng không được cung cấp

1) Thiết bị: đầu đọc vi tấm, máy in, máy đồng nhất, thiết bị sấy nitơ, máy xoáy, máy ly tâm, ống đo, cân (độ nhạy cảm ứng 0,01 g), tủ ấm, nồi cách thủy;

2) Micropipettors: đơn kênh 20-200 µL, 100-1000 µL và đa kênh 30 ～ 300 µl;

3) Thuốc thử: NaOH, etyl axetat, n-Hexan, HCI (khoảng 36,5%), K2HPO4 · 3H2O

 

5. Xử lý trước mẫu

Hướng dẫn

Các điểm sau đây phải được xử lý trước khi xử lý trước bất kỳ loại mẫu nào:

1) Chỉ có thể sử dụng các đầu hút dùng một lần cho các thí nghiệm và các đầu hút phải được thay đổi khi được sử dụng để hấp thụ các thuốc thử khác nhau;

2) Trước khi thí nghiệm, mỗi dụng cụ thí nghiệm phải sạch sẽ và phải vệ sinh lại nếu cần, để tránh nhiễm bẩn ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

Chuẩn bị dung dịch trước khi xử lý trước mẫu:

1) K2HPO4 0,1 M: hòa tan 11,4 g K2HPO4 · 3H2O trong nước đã khử ion thành 500mL.

2) HCl 1 M: hòa tan 8,6mL HCI (khoảng 36,5%) trong nước đã khử ion thành 100mL.

3) NaOH 1 M: hòa tan 4g NaOH trong nước khử ion thành 100mL.

4) dung dịch hòa tan lại đậm đặc 2 × được pha loãng với nước khử ion theo tỷ lệ 1: 1 (1mL dung dịch hòa tan lại đậm đặc + 1mL nước khử ion), được sử dụng để hòa tan lại mẫu.

 

5.1 Chuẩn bị mẫu

một)Mô, trứng

1) Cân 1 ± 0,05g mẫu đã đồng nhất, thêm 4mL nước cất, 0,5mL 1 M HCI và 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) vào mỗi ống, lắc đều trong 2 phút ;.

2) Ủ ở 37 ℃ qua đêm (khoảng 16 giờ) hoặc ủ ở 56 ℃ bằng cách thủy (2 giờ).

3) Cho 5mL K2HPO4 0,1M, 0,4mL NaOH 1M và 6mL etyl axetat vào mỗi ống, lắc trong 30s.

4) Ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút (nếu có nhũ tương hóa hoặc lớp etyl axetat không đủ 3ml, ủ mẫu trong nồi cách thủy 80 ℃ trong 10 phút và ly tâm nhiều lần; hoặc tăng tốc độ và kéo dài thời gian ly tâm).

5) Chuyển 3mL lớp etyl axetat vào một ống ly tâm mới và làm bay hơi đến khô bằng nitơ hoặc không khí ở 50 ℃.

6) Hòa tan cặn khô trong 2mL N-hexan, thêm 1mL dung dịch hòa tan lại đã pha loãng, trộn đều trong 30 giây, ly tâm ở trên 4000 vòng / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút;Loại bỏ pha N-hexan lớp trên (nếu có nhũ tương, sau khi loại bỏ pha N-hexan lớp trên, ủ mẫu trên nồi cách thủy 70 trong 10-20 phút, ly tâm nhiều lần).

7) Lấy 50 µL thấp hơn để phân tích.

Thời gian pha loãng mẫu: 2

 

b) Em yêu

1) Cân 2 ± 0,05g mẫu đã đồng nhất (mật ong), thêm 4mL nước cất, 0,5mL 1 M HCI và 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) vào mỗi ống, lắc đều trong 2 phút ;.

2) Ủ ở 37 ℃ qua đêm (khoảng 16 giờ) hoặc ủ ở 56 ℃ bằng cách thủy (2 giờ).

3) Cho 5mL K2HPO4 0,1M, 0,4mL NaOH 1M và 6mL etyl axetat vào mỗi ống, lắc trong 30s.

4) Ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút (nếu có nhũ tương hóa hoặc lớp etyl axetat không đủ 3ml, ủ mẫu trong nồi cách thủy 80 ℃ trong 10 phút và ly tâm nhiều lần; hoặc tăng tốc độ và kéo dài thời gian ly tâm).

5) Chuyển 3mL lớp etyl axetat vào một ống ly tâm mới và làm bay hơi đến khô bằng nitơ hoặc không khí ở 50 ℃.

6) Hòa tan cặn khô trong 2mL N-hexan, thêm 1mL dung dịch hòa tan lại đã pha loãng, trộn đều trong 30 giây, ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút;Loại bỏ pha N-hexan lớp trên (nếu có nhũ tương, sau khi loại bỏ pha N-hexan lớp trên, ủ mẫu trên nồi cách thủy 70 trong 10-20 phút, ly tâm nhiều lần).

7) Lấy 50 µL thấp hơn để phân tích.

Thời gian pha loãng mẫu: 1

 

6. Quy trình ELISA

6.1 Hướng dẫn

1) Mang tất cả thuốc thử và dải vi giếng đến nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trước khi sử dụng;

2) Trả tất cả thuốc thử về 2-8 ℃ ngay sau khi sử dụng;

3) Độ tái lập của phân tích ELISA, ở một mức độ lớn, phụ thuộc vào tính nhất quán của quá trình rửa đĩa.Thao tác rửa đĩa chính xác là điểm mấu chốt trong quy trình ELISA;

4) Đối với việc ủ ở nhiệt độ không đổi, tất cả các mẫu và thuốc thử phải tránh tiếp xúc với ánh sáng, và mỗi tấm phải được đậy kín bằng màng che.

 

6.2 Quy trình hoạt động

1)Đưa kit thử về nhiệt độ phòng (20-25 ℃) ít nhất 30 min, lưu ý lắc đều từng thuốc thử để trộn đều trước khi sử dụng, đặt các dải vi giếng cần thiết vào khung bản.Đậy kín lại tấm ngăn chưa sử dụng, bảo quản ở nhiệt độ 2-8 ℃, không để đông lạnh.

2)Chuẩn bị dung dịch: pha loãng 40mL dung dịch đệm rửa đậm đặc 20 × với nước khử ion theo tỷ lệ 1:19 (1 phần đệm rửa 20 × đậm đặc + 19 phần nước khử ion).Hoặc chuẩn bị khi cần thiết..

3)Đánh số: đánh số các giếng vi mô theo mẫu và dung dịch chuẩn;Mỗi mẫu và dung dịch chuẩn phải được thực hiện lặp lại, ghi lại vị trí của chúng.

4)Thêm 50 µL mẫu hoặc dung dịch chuẩn vào các giếng lặp lại riêng biệt;thêm 50 ul liên hợp enzym, sau đó 50 µL dung dịch kháng thể làm việc vào mỗi giếng, trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa thủ công.Đậy kín tấm vi bằng màng che và ủ ở 25 ℃ trong 30 phút.

5)Đổ chất lỏng ra khỏi microwell, đảo cho khô trên giấy thấm, thêm 250 µL / giếng đệm rửa để rửa microplate trong 15-30 s, sau đó vớt ra và làm khô bằng giấy thấm, lặp lại 4-5 lần.(Nếu có bong bóng sau khi vỗ, hãy cắt chúng bằng đầu sạch).

6)Tạo màu: thêm 50 µL chất nền A và sau đó 50 µL chất nền B vào mỗi giếng.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa thủ công, sau đó ủ ở 25 ℃ trong 15 phút ở nơi tối để tạo màu.

7)Cách xác định: cho vào mỗi giếng 50 µL dung dịch dừng.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa thủ công.Đặt bước sóng của đầu đọc vi tấm ở 450nm để xác định giá trị OD của mọi giếng.(Khuyến nghị đọc giá trị OD ở bước sóng kép 450 / 630nm trong vòng 5 phút).

 

7. Kết quả phán đoán

Có hai phương pháp để đánh giá kết quả: phương pháp thứ nhất là phán đoán thô, còn phương pháp thứ hai là xác định định lượng.Lưu ý rằng giá trị OD của mẫu có mối tương quan nghịch với nồng độ AOZ.

7.1 Xác định định tính

Khoảng nồng độ (ng / mL) của AOZ có thể thu được từ việc so sánh giá trị OD trung bình của mẫu với giá trị OD của dung dịch chuẩn.Giả sử rằng giá trị OD của mẫuⅠ là 0,3 và của mẫuⅡ là 1,0, giá trị OD của các dung dịch tiêu chuẩn là: 2,243 cho 0ppb, 1,816 cho 0,01ppb, 1,415 cho 0,03ppb, 0,74 cho 0,09ppb, 0,313 cho 0,27ppb , 0,155 cho 0,81ppb, theo đó phạm vi nồng độ của mẫuⅠ là 0,27ppb đến 0,81ppb, và của mẫuⅡ là 0,03ppb đến 0,09ppb.

7.2 Xác định định lượng

Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ nhận được cho giá trị OD trung bình (B) của mẫu và dung dịch chuẩn chia cho giá trị OD (B0) của dung dịch chuẩn đầu tiên (0 chuẩn) và sau đó nhân với 100%, nghĩa là ,

 

Phần trăm giá trị độ hấp thụ =	B	× 100%
	B0

 

B — giá trị OD trung bình của mẫu hoặc dung dịch chuẩn

B0 — giá trị OD trung bình của dung dịch chuẩn 0 ng / mL

Vẽ đường chuẩn với phần trăm hấp thụ của dung dịch chuẩn và các giá trị bán kỳ của dung dịch chuẩn AOZ (ng / mL) tương ứng là trục Y và X.Đọc nồng độ tương ứng của mẫu từ đường chuẩn bằng cách đưa phần trăm hấp thụ của nó vào đường chuẩn.Giá trị thu được sau đó được nhân với lần pha loãng tương ứng, cuối cùng thu được nồng độ AOZ trong mẫu.

 

8. Biện pháp phòng ngừa

1)Nhiệt độ phòng dưới 25 ℃ hoặc nhiệt độ của thuốc thử và mẫu không được đưa về nhiệt độ phòng (20-25 ℃) sẽ dẫn đến giá trị OD tiêu chuẩn thấp hơn.

2)Sự khô của tấm vi kim loại trong quá trình giặt sẽ đi kèm với các tình huống bao gồm các đường cong chuẩn phi tuyến tính và độ tái lập không mong muốn;Vì vậy, hãy tiếp tục bước tiếp theo ngay sau khi rửa.

3)Trộn đều, nếu không sẽ có độ tái lập không mong muốn.

4)Dung dịch dừng là dung dịch axit sunfuric 2 M, tránh tiếp xúc với da.

5)Không sử dụng bộ quá hạn sử dụng.Việc sử dụng thuốc thử pha loãng hoặc pha tạp chất từ ​​bộ dụng cụ sẽ dẫn đến sự thay đổi độ nhạy và giá trị OD phát hiện.Không trao đổi thuốc thử từ các bộ dụng cụ của các lô khác nhau để sử dụng.

6)Đặt tấm vi không sử dụng vào một túi tự động niêm phong để niêm phong lại.Dung dịch chuẩn và dung dịch không màu trước đây nhạy cảm với ánh sáng, do đó chúng không thể tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng.

7)Loại bỏ dung dịch màu có bất kỳ màu nào cho thấy sự biến chất của dung dịch này.Giá trị phát hiện của dung dịch chuẩn 1 (0 ppb) nhỏ hơn 0,5 cho thấy sự thoái hóa của nó.

số 8)Nhiệt độ phản ứng tối ưu là 25 ℃, và nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp sẽ dẫn đến thay đổi độ nhạy phát hiện và giá trị OD.

 

9. Bảo quản và hạn sử dụng

Bảo quản: bảo quản ở nhiệt độ 2-8 ℃, không đông lạnh.

Hạn sử dụng: 12 tháng;ngày sản xuất được ghi trên hộp.

Lưu ý: Nếu gói hút chân không của tấm kính có rò rỉ, nó vẫn còn giá trị sử dụng, không ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm, hãy thoải mái sử dụng.

 

 

Q1: Bạn sẽ mất bao lâu để giao hàng?
A1: Thường giao hàng trong vòng 7 ngày làm việc.

 

Q2: Bạn có hỗ trợ OEM / ODM không?
A2: có thể được hỗ trợ.Chúng tôi có thể tùy chỉnh theo nhu cầu cụ thể của bạn và số lượng cụ thể.

 

Q3: Làm thế nào là nhà máy của bạn đang làm về mặt kiểm soát chất lượng?
A3: Chúng tôi có chứng nhận ISO9001 và chứng nhận ISO13485, cho đến nay tất cả các quá trình sản xuất, chúng tôi có các quy tắc tiêu chuẩn, chúng tôi tuân thủ các hành vi có liên quan và luật pháp của chính phủ.

 

Q4: Dịch vụ sau bán hàng có được đảm bảo không?
A4: Chúng tôi cung cấp dịch vụ sau bán hàng kỹ thuật trực tuyến chuyên nghiệp.Nếu sản phẩm không thành công trong quá trình thử nghiệm, chúng tôi có thể cung cấp
hướng dẫn 1-1 qua điện thoại, video và các hình thức khác.

 

Q5: Số lượng đặt hàng tối thiểu của bạn là bao nhiêu?
A5: 1Kit.

 

Q6: Phương thức vận chuyển là gì?
A6: Nó có thể được vận chuyển bằng cách chuyển phát nhanh (FEDEX, UPS, DHL, EMS, v.v.) hoặc bằng đường hàng không và mặt đất. Vui lòng xác nhận với chúng tôi trước khi đặt hàng.