Bộ kiểm tra an toàn thực phẩm Nitrofuran SEM ELISA cho độ nhạy của sữa 0,02ppb 96Wells / Kit

Bộ kiểm tra an toàn thực phẩm Nitrofuran SEM ELISA cho độ nhạy cảm của sữa 0,02ppb 96Wells / Kit

 

1. Nguyên tắc Bộ kiểm tra An toàn Thực phẩm Nitrofuran SEM ELISA

 

Bộ xét nghiệm này dựa trên xét nghiệm miễn dịch enzym cạnh tranh để phát hiện Nitrofuran (SEM) trong mẫu.Các kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng.Nitrofuran (SEM) trong mẫu và các kháng nguyên ghép nối được phủ sẵn trên các sọc vi giếng cạnh tranh để giành được các kháng thể chống SEM.Sau khi bổ sung liên hợp enzyme, chất nền TMB được thêm vào để tạo màu.Giá trị mật độ quang học (OD) của mẫu có mối tương quan nghịch với SEM trong đó.Giá trị này được so sánh với đường chuẩn và sau đó thu được nồng độ SEM.

 

2. Thông số kỹ thuật

 

Độ nhạy: 0,02ppb

Nhiệt độ ủ: 25 ℃

Thời gian ủ: 30 phút ～ 15 phút

Giới hạn phát hiện Mô, trứng, mật ong: 0,1ppb

Tỷ lệ phản ứng chéo

SEM 100%

AMOZ <0,1%

AOZ <0,1%

AHD <0,1%

Tỷ lệ thu hồi

Mô 75 ± 25%

Mật ong 70 ± 20%

Trứng 95 ± 25%

 

3. Các thành phần của bộ kiểm tra an toàn thực phẩm Nitrofuran SEM ELISA

 

1	Dải giếng siêu nhỏ	12 dải với 8 có thể tháo rời giếng mỗi
2	6 × dung dịch tiêu chuẩn (mỗi lần 1 mL)	0ppb	0,02ppb
		0,06ppb	0,18ppb
		0,54ppb	1,62ppb
3	Liên hợp enzyme	7ml	nắp màu đỏ
4	Giải pháp làm việc kháng thể	7ml	mũ lưỡi trai màu xanh
5	Chất nền A	7ml	mũ lưỡi trai màu trắng
6	Chất nềnB	7ml	nắp đen
7	Giải pháp dừng	7ml	nắp vàng
số 8	20 × đệm giặt đậm đặc	40ml	mũ lưỡi trai màu trắng
9	2 lần dung dịch hòa tan cô đặc	50ml	nắp trong suốt
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	nắp đen

 

4. Vật liệu được yêu cầu nhưng không được cung cấp

 

1) Thiết bị: đầu đọc vi tấm, máy in, máy đồng nhất, thiết bị sấy nitơ, máy xoáy, máy ly tâm, ống đo, cân (độ nhạy cảm ứng 0,01 g), tủ ấm, nồi cách thủy;

2) Micropipettors: đơn kênh 20-200µL, 100-1000µL và đa kênh 30 ～ 300µl;

3) Thuốc thử: NaOH, etyl axetat, n-Hexan, HCI (khoảng 36,5%), K2HPO4 · 3H2O.

 

5. Xử lý trước mẫu

 

Hướng dẫn

Các điểm sau đây phải được xử lý trước khi xử lý trước bất kỳ loại mẫu nào:

1) Chỉ có thể sử dụng các đầu hút dùng một lần cho các thí nghiệm và các đầu hút phải được thay đổi khi được sử dụng để hấp thụ các thuốc thử khác nhau;

2) Trước khi thí nghiệm, mỗi dụng cụ thí nghiệm phải sạch sẽ và phải vệ sinh lại nếu cần, để tránh nhiễm bẩn ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

Chuẩn bị dung dịch trước khi xử lý trước mẫu:

1) K2HPO4 0,1 M: hòa tan 11,4 g K2HPO4 · 3H2O trong nước đã khử ion thành 500mL.

2) HCl 1 M: hòa tan 8,6mL HCI (khoảng 36,5%) trong nước đã khử ion thành 100mL.

3) NaOH 1 M: hòa tan 4g NaOH trong nước khử ion thành 100mL.

4) dung dịch hòa tan lại đậm đặc 2 × được pha loãng với nước khử ion theo tỷ lệ 1: 1 (1mL dung dịch hòa tan lại đậm đặc + 1mL nước khử ion), được sử dụng để hòa tan lại mẫu.

 

5.1 Chuẩn bị mẫu

a) Mô, trứng

1) Cân 1 ± 0,05g mẫu đã đồng nhất, thêm 4mL nước cất, 0,5mL 1 M HCI và 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) vào mỗi ống, lắc đều trong 2 phút ;.

2) Ủ ở 37 ℃ qua đêm (khoảng 16 giờ) hoặc ủ ở 56 ℃ bằng cách thủy (2 giờ).

3) Cho 5mL K2HPO4 0,1M, 0,4mL NaOH 1M và 6mL etyl axetat vào mỗi ống, lắc trong 30s.

4) Ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút (nếu có nhũ tương hóa hoặc lớp etyl axetat không đủ 3ml, ủ mẫu ở nồi cách thủy 80 ℃ trong 10 phút và ly tâm nhiều lần; hoặc tăng tốc độ và kéo dài thời gian ly tâm).

5) Chuyển 3mL lớp etyl axetat vào một ống ly tâm mới và làm bay hơi đến khô bằng nitơ hoặc không khí ở 50 ℃.

6) Hòa tan cặn khô trong 2mL N-hexan, thêm 1mL dung dịch hòa tan lại đã pha loãng, trộn đều trong 30 giây, ly tâm ở trên 4000 vòng / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút;Loại bỏ pha N-hexan lớp trên (nếu có nhũ tương, sau khi loại bỏ pha N-hexan lớp trên, ủ mẫu trên nồi cách thủy 70 ℃ trong 10-20 phút, ly tâm nhiều lần).

7) Lấy 50 µL thấp hơn để phân tích.

Thời gian pha loãng mẫu: 2

b) Em yêu

1) Cân 2 ± 0,05g mẫu đã đồng nhất (mật ong), thêm 4mL nước cất, 0,5mL 1 M HCI và 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) vào mỗi ống, lắc đều trong 2 phút ;.

2) Ủ ở 37 ℃ qua đêm (khoảng 16 giờ) hoặc ủ ở 56 ℃ bằng cách thủy (2 giờ).

3) Cho 5mL K2HPO4 0,1M, 0,4mL NaOH 1M và 6mL etyl axetat vào mỗi ống, lắc trong 30s.

4) Ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút (nếu có nhũ tương hóa hoặc lớp etyl axetat không đủ 3ml, ủ mẫu ở nồi cách thủy 80 ℃ trong 10 phút và ly tâm nhiều lần; hoặc tăng tốc độ và kéo dài thời gian ly tâm).

5) Chuyển 3mL lớp etyl axetat vào một ống ly tâm mới và làm bay hơi đến khô bằng nitơ hoặc không khí ở 50 ℃.

6) Hòa tan cặn khô trong 2mL N-hexan, thêm 1mL dung dịch hòa tan lại đã pha loãng, trộn đều trong 30 giây, ly tâm ở nhiệt độ trên 4000r / phút ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 10 phút;Loại bỏ pha N-hexan lớp trên (nếu có nhũ tương, sau khi loại bỏ pha N-hexan lớp trên, ủ mẫu trên nồi cách thủy 70 ℃ trong 10-20 phút, ly tâm nhiều lần).

7) Lấy 50 µL thấp hơn để phân tích.

Thời gian pha loãng mẫu: 1

 

6. Quy trình ELISA

 

6.1 Hướng dẫn

1) Mang tất cả thuốc thử và dải vi giếng đến nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trước khi sử dụng;

2) Trả tất cả thuốc thử về 2-8 ℃ ngay sau khi sử dụng;

3) Độ tái lập của phân tích ELISA, ở một mức độ lớn, phụ thuộc vào tính nhất quán của quá trình rửa đĩa.Thao tác rửa đĩa chính xác là điểm mấu chốt trong quy trình ELISA;

4) Đối với việc ủ ở nhiệt độ không đổi, tất cả các mẫu và thuốc thử phải tránh tiếp xúc với ánh sáng, và mỗi tấm phải được đậy kín bằng màng che.

 

6.2 Quy trình vận hành

1) Đặt bộ dụng cụ ở nhiệt độ phòng (20-25 ° C) trong ít nhất 30 phút, lưu ý rằng mỗi loại thuốc thử phải được lắc và trộn đều trước khi sử dụng, và đặt các dải microwell cần thiết vào khung bản.Các vi mẫu không sử dụng phải được đóng lại và bảo quản ở 2-8 ° C, không để đông lạnh.

2) Chuẩn bị dung dịch: Lấy 40 mL đệm rửa đậm đặc 20 × và pha loãng với nước khử ion theo tỷ lệ 1:19 (1 phần đệm rửa 20 × đậm đặc + 19 phần nước khử ion).Hoặc chuẩn bị khi cần thiết.

3) Đánh số: Đánh số microwell theo mẫu và dung dịch chuẩn;Mỗi mẫu và dung dịch chuẩn phải được tạo thành bản sao, và vị trí của chúng phải được ghi lại.

4) Thêm 50µL mẫu hoặc dung dịch chuẩn để nhân đôi các giếng;thêm 50ul liên hợp enzym vào mỗi giếng, sau đó thêm 50µL dung dịch kháng thể hoạt động và lắc đĩa để trộn nhẹ.Dùng màng che đậy kín vi tấm và ủ ở 25 ° C trong 30 phút.

5) Đổ chất lỏng trong microwell ra, thấm khô trên giấy thấm, thêm 250 μL / giếng rửa đệm để rửa đĩa microwell trong 15-30s, sau đó lấy ra và thấm khô bằng giấy thấm, lặp lại 4-5 lần.(Nếu có bọt khí sau khi khai thác, hãy cắt chúng bằng đầu sạch).

6) Sự phát triển màu sắc: Thêm 50 µL Chất nền A và 50 µL Chất nền B vào mỗi giếng.Lắc đĩa bằng tay để trộn nhẹ và ủ ở 25 ° C trong 15 phút trong bóng tối để màu phát triển.

7) Thử nghiệm: Thêm 50 μL dung dịch dừng vào mỗi giếng.Trộn nhẹ bằng cách lắc đĩa bằng tay.Đặt bước sóng của đầu đọc vi tấm là 450 nm để xác định giá trị OD của mỗi giếng.(Nên đọc giá trị OD ở bước sóng kép 450 / 630nm trong vòng 5 phút).

 

7. Kết quả phán đoán

 

Có hai phương pháp để đánh giá kết quả: phương pháp thứ nhất là phán đoán thô, còn phương pháp thứ hai là xác định định lượng.Lưu ý rằng giá trị OD của mẫu có mối tương quan nghịch với nội dung của SEM.

7.1 Xác định định tính

Khoảng nồng độ (ng / mL) có thể thu được từ việc so sánh giá trị OD trung bình của mẫu với giá trị OD của dung dịch chuẩn.Giả sử rằng giá trị OD của mẫuⅠ là 0,3 và của mẫuⅡ là 1,0ppb, giá trị OD của các dung dịch tiêu chuẩn là: 2,243 cho 0ppb, 1,816 cho 0,02ppb, 1,415 cho 0,06ppb, 0,74 cho 0,18ppb, 0,313 cho 0,54 ppb, 0,155 cho 1,62ppb, theo đó phạm vi nồng độ của mẫuⅠ là 0,54 đến 1,62ppb, và của mẫuⅡ là 0,06 đến 0,18ppb.

7.2 Xác định định lượng

Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ nhận được cho giá trị OD trung bình (B) của mẫu và dung dịch chuẩn chia cho giá trị OD (B0) của dung dịch chuẩn đầu tiên (0 chuẩn) và sau đó nhân với 100%, nghĩa là ,

Phần trăm giá trị độ hấp thụ =	B	× 100%
	B0

B — giá trị OD trung bình (giếng kép) của mẫu hoặc dung dịch chuẩn

B0 — giá trị OD trung bình của dung dịch chuẩn 0ng / mL

Vẽ đường chuẩn với phần trăm hấp thụ của dung dịch chuẩn và các giá trị bán kỳ của dung dịch chuẩn SEM (ng / mL) lần lượt là trục Y và trục X.Đọc nồng độ tương ứng của mẫu từ đường chuẩn bằng cách đưa phần trăm hấp thụ của nó vào đường chuẩn.Giá trị thu được sau đó được nhân với lần pha loãng tương ứng, cuối cùng thu được nồng độ SEM trong mẫu.

 

8. Biện pháp phòng ngừa

 

1) Nếu nhiệt độ phòng thấp hơn 25 ℃ hoặc nhiệt độ thuốc thử và mẫu không trở về nhiệt độ phòng (20-25 ℃), giá trị OD tiêu chuẩn sẽ giảm xuống.

2) Trong quá trình rửa, việc làm khô tấm vi hạt sẽ đi kèm với sự không tuyến tính của đường chuẩn và độ tái lập không lý tưởng;do đó, tiến hành bước tiếp theo ngay sau khi rửa.

3) Trộn đều, nếu không độ tái lập sẽ kém.

4) Dung dịch dừng là dung dịch axit sunfuric 2 M, tránh tiếp xúc với da.

5) Không sử dụng bộ quá hạn sử dụng.Việc sử dụng thuốc thử đã pha loãng hoặc pha tạp từ bộ dụng cụ có thể dẫn đến thay đổi độ nhạy và giá trị OD phát hiện.Không thay thế thuốc thử trong các lô khác nhau của bộ dụng cụ.

6) Đựng lại các mẫu vi sinh không sử dụng trong túi ziplock.Các dung dịch tiêu chuẩn và chất ghép không màu nhạy cảm với ánh sáng và không thể tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng.

7) Bỏ bất kỳ dung dịch tạo màu nào có màu cho biết dung dịch đó đã bị giảm chất lượng.Giá trị phát hiện nhỏ hơn 0,5 đối với Dung dịch Chuẩn 1 (0 ppb) cho thấy sự xuống cấp.

8) Nhiệt độ phản ứng tối ưu là 25 ℃, và độ nhạy phát hiện và giá trị OD sẽ thay đổi nếu nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp.

 

9. Bảo quản và hạn sử dụng

 

Bảo quản: Bảo quản ở 2-8 ° C, không đông lạnh.
Hạn sử dụng: 12 tháng;ngày sản xuất được ghi trên hộp.
Lưu ý: Nếu bao bì hút chân không bị rò rỉ, nó vẫn có thể được sử dụng mà không ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm, vì vậy bạn có thể yên tâm sử dụng.

 

Q1: Khi nào nó sẽ được vận chuyển?
A1: Chúng tôi sẽ chuyển hàng cho bạn trong thời gian sớm nhất trong vòng 7 ngày làm việc kể từ khi nhận được tiền thanh toán.(Trong trường hợp do các yếu tố bên ngoài như dịch bệnh, việc giao hàng có thể bị chậm lại)

 

Câu hỏi 2: Nó có hỗ trợ OEM / ODM không?
A2: Nó có thể được hỗ trợ, nhưng số lượng cụ thể cần phải hơn 100.000 chiếc, thuận tiện cho các sản phẩm tùy chỉnh.

 

Q3: Làm thế nào là nhà máy của bạn đang làm về mặt kiểm soát chất lượng?
A3: Chúng tôi đã được chứng nhận quốc gia ISO9001 và ISO13485.Quy trình sản xuất của chúng tôi tuân theo quy trình tiêu chuẩn để đảm bảo chất lượng sản phẩm tối ưu.

 

Q4: Làm thế nào để cung cấp dịch vụ sau bán hàng?
A4: Chúng tôi cung cấp dịch vụ sau bán hàng kỹ thuật trực tuyến chuyên nghiệp.Chúng tôi có thể cung cấp cho bạn hướng dẫn trực tiếp qua video, điện thoại, v.v.

 

Q5: Phương thức thanh toán là gì?
A5: Chúng tôi nhận được thanh toán bằng T / T.

 

Q6: Làm thế nào để vận chuyển?
A6: Chọn phương thức vận chuyển tốt nhất cho bạn bằng cách nhận báo giá từ nhiều hãng vận chuyển hợp tác của chúng tôi và cũng vận chuyển theo yêu cầu của bạn.