Bộ công cụ ELISA chẩn đoán MQCA cho vịt thịt gà 96 Wells / Kit Độ nhạy 0,5 Ppb

Bộ xét nghiệm MQCA ELISA cho Gà Heo Vịt 96 Wells/Kit Độ nhạy 0,5 ppb

 

1. Nguyên tắc

Bộ xét nghiệm này dựa trên xét nghiệm miễn dịch enzym cạnh tranh để phát hiện MQCA trong mẫu.Các kháng nguyên ghép được phủ sẵn trên các sọc vi giếng.MQCA trong mẫu và các kháng nguyên ghép nối được phủ trước trên các sọc của giếng vi mô cạnh tranh để giành kháng thể kháng MQCA.Sau khi thêm chất liên hợp enzyme, cơ chất TMB được thêm vào để tạo màu.Giá trị mật độ quang (OD) của mẫu có mối tương quan nghịch với MQCA trong đó.Giá trị này được so sánh với đường chuẩn và sau đó thu được nồng độ MQCA.

 

2. Thông số kỹ thuật

Độ nhạy: 0,5 ppb
Nhiệt độ lồng ấp: 25℃
Thời gian ủ: 30 phút～15 phút

Giới hạn phát hiện:
mô 1 ppb

Tỷ lệ phản ứng chéo:
MQCA 100%
Olaquindox <0,1%
Tỷ lệ thu hồi:
Mô 85% ± 10%

 

3. Linh kiện

 

1	Dải giếng vi thể	12 dải với 8 giếng có thể tháo rời mỗi dải
2	Dung dịch chuẩn 6× (mỗi dung dịch 1 mL)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 phần trăm	4,5 phần trăm
		13,5 phần trăm	40,5 phần trăm
3	Liên hợp Enzyme đậm đặc	1ml	nắp màu đỏ
4	Giải pháp làm việc kháng thể	8ml	mũ lưỡi trai màu xanh
5	chất nền A	7ml	mũ lưỡi trai màu trắng
6	Chất nềnB	7ml	mũ đen
7	Giải pháp dừng	7ml	mũ vàng
số 8	giải pháp tái hòa tan	50ml	nắp trong suốt
9	Đệm rửa đậm đặc 20×	40ml	mũ lưỡi trai màu trắng

 

4. Vật liệu cần thiết nhưng không được cung cấp

1) Thiết bị: đầu đọc vi bản (450 nm / 630 nm), máy đồng hóa, máy tạo dao động, máy ly tâm, pipet đo, thiết bị làm khô nitơ và cân (độ nhạy 0,01 g), tủ ấm.
2) Micropipet: đơn kênh 20 đến 200 µL và 100 đến 1000 µL và đa kênh 30～300 µl;
3) Thuốc thử:Etyl axetat, n-hexan, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Tiền xử lý mẫu

Hướng dẫn
Các điểm sau đây phải được xử lý trước khi xử lý sơ bộ bất kỳ loại mẫu nào:
1) Chỉ có thể sử dụng đầu hút dùng một lần cho các thí nghiệm và phải thay đổi đầu hút khi sử dụng để hấp thụ các thuốc thử khác nhau;
2) Trước khi tiến hành thí nghiệm, từng dụng cụ thí nghiệm phải được kiểm tra sạch sẽ, nếu cần thiết phải vệ sinh lại để tránh nhiễm bẩn ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

Chuẩn bị mẫu
1) Dịch chiết mẫu (Bảo quản ở nhiệt độ 2~8℃ trong 1 tháng): Lấy 8,6ml HCl đậm đặc, thêm nước khử ion đến 500ml, sau đó thêm 10g NaCl để lấy dịch chiết mẫu.

5.1 Mô gia súc, gia cầm (Gà, vịt, lợn):
1. Lấy 2 ± 0,05 g mẫu đã đồng nhất cho vào ống ly tâm 50ml;
2. Thêm 4 mL Dịch chiết mẫu, lắc kỹ trong 1 phút;
3. Thêm 4ml Ethyl axetat và 2ml CH3CN, lắc kỹ trong 10 giây;Ly tâm 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng (20 - 25℃) trong 10 phút (Lưu ý: Bước này chỉ cần lắc trong 10s, lắc quá lâu sẽ dẫn đến hiện tượng nhũ hóa, nếu xuất hiện nhũ tương thì lấy một lượng dịch nổi nhất định sau đó lắc nhẹ ống trong 5 giây , ly tâm lại thì có thể lấy đủ dịch nổi);
4. Lấy 3 mL pha hữu cơ lớp trên vào bình chứa trong suốt, bên dưới để làm khô bằng Nitơ hoặc không khí ở
cách thủy 56℃;
5. Thêm 1ml N-hexane, lắc trong 30 giây, sau đó thêm 0,5ml Dung dịch hòa tan lại, lắc và trộn kỹ trong 30 giây;máy ly tâm với tốc độ 4000 r/min ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong 5 phút.
6. Loại bỏ pha hữu cơ ở lớp trên. Lấy 50 µL lớp dưới để phân tích.
Độ pha loãng của mẫu: 0,5

 

6. Quy trình ELISA

6.1 Hướng dẫn
1) Đưa tất cả thuốc thử và dải giếng vi thể về nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trước khi sử dụng;
2) Đưa tất cả thuốc thử về 2-8 ℃ ngay sau khi sử dụng;
3) Độ lặp lại của phép phân tích ELISA, ở mức độ lớn, phụ thuộc vào tính nhất quán của quá trình rửa đĩa.Thao tác rửa đĩa chính xác là điểm mấu chốt trong quy trình ELISA;
4) Để ủ ở nhiệt độ không đổi, tất cả các mẫu và thuốc thử phải tránh tiếp xúc với ánh sáng và mỗi tấm vi mạch phải được niêm phong bằng màng che.

6.2 Quy trình vận hành
1) Lấy tất cả các thuốc thử cần thiết ra và đặt ở nhiệt độ phòng (20-25 ℃) trong ít nhất 30 phút.Lưu ý rằng mỗi thuốc thử phải được lắc để trộn đều trước khi sử dụng;
2) Lấy các dải giếng vi thể và khung đĩa cần thiết.Niêm phong lại tấm vi mạch chưa sử dụng, bảo quản ở 2-8 ℃;
3) Chuẩn bị dung dịch: pha loãng 40 mL dung dịch đệm rửa đậm đặc 20× với nước khử ion theo tỷ lệ 1:19 (1 phần dung dịch đệm rửa đậm đặc 20× + 19 phần nước khử ion) hoặc chuẩn bị theo lượng cần thiết;
4) Đánh số: đánh số các giếng vi mô theo mẫu và dung dịch chuẩn;mỗi mẫu và dung dịch chuẩn phải được thực hiện lặp lại;ghi lại vị trí của họ;
5) Chuẩn bị dung dịch hỗn hợp dung dịch hoạt động kháng thể và liên hợp Enzyme đậm đặc: Trộn đều dung dịch hoạt động kháng thể và liên hợp Enzyme đậm đặc theo tỷ lệ 10:1 (1000ul dung dịch hoạt động kháng thể + 100ul liên hợp Enzyme đậm đặc, dung dịch hỗn hợp này nên được sử dụng một lần, không thể được lưu trữ, số lượng gói có thêm số lượng, chuẩn bị theo tỷ lệ là được.)
6) Thêm 20 µL mẫu hoặc dung dịch chuẩn vào các giếng nhân bản riêng biệt, sau đó thêm 70 µL dung dịch hỗn hợp dung dịch làm việc kháng thể và liên hợp Enzyme đậm đặc vào từng giếng.Trộn đều bằng cách lắc nhẹ, đậy kín tấm vi mạch bằng màng che và ủ ở 25℃ trong bóng tối trong 30 phút;
7) Rửa tấm vi mạch bằng dung dịch đệm rửa ở 250 µL/giếng từ bốn đến năm lần;ngâm kỹ với đệm rửa trong 15-30 giây, vỗ cho khô bằng giấy thấm (nếu sau khi vỗ có bong bóng thì dùng đầu tăm sạch cắt bỏ);
8) Tạo màu: thêm 50 µL dung dịch chất nền A và 50 µL dung dịch B vào mỗi giếng.Trộn bằng cách lắc nhẹ và ủ ở 25 ℃ trong 15 phút trong bóng tối để tạo màu;
9) Cách xác định: thêm 50 µL dung dịch dừng vào mỗi giếng.Trộn bằng cách lắc nhẹ.Đặt bước sóng của đầu đọc vi bản ở 450 nm để xác định giá trị OD.(khuyến nghị đọc giá trị OD ở bước sóng kép 450/630 nm trong vòng 5 phút) .

 

7. Đánh giá kết quả

Có hai phương pháp để đánh giá kết quả;cái đầu tiên là phán đoán sơ bộ, trong khi cái thứ hai là xác định định lượng.Lưu ý rằng giá trị OD của mẫu có mối tương quan nghịch với hàm lượng MQCA.

7.1 Xác định định tính
Có thể thu được khoảng nồng độ (ng/mL) từ việc so sánh giá trị OD trung bình của mẫu với giá trị của dung dịch chuẩn.Giả sử rằng giá trị OD của mẫu Ⅰ là 0,3 và của mẫu Ⅱ là 1,0, trong khi giá trị OD của các dung dịch chuẩn như sau: 2,043 cho 0 ppb, 1,716 cho 0,5 ppb, 1,215 cho 1,5 ppb, 0,74 cho 4,5 ppb, 0,313 cho 13,5 ppb và 0,155 cho 40,5 ppb, theo đó, khoảng nồng độ của mẫuⅠlà 13,5 đến 40,5ppb và của mẫu Ⅱ là 1,5 đến 4,5 ppb.

7.2 Xác định định lượng
Giá trị trung bình của các giá trị độ hấp thụ tương đương với tỷ lệ phần trăm của giá trị OD trung bình (B) của mẫu và dung dịch chuẩn chia cho giá trị OD (B0) của dung dịch chuẩn đầu tiên (chuẩn 0) và sau đó nhân với 100%. , đó là,

 

Phần trăm giá trị độ hấp thụ =	b	×100%
	B0

 

 

B—giá trị OD trung bình (giếng kép) của mẫu hoặc dung dịch chuẩn
B0—giá trị OD trung bình của dung dịch chuẩn 0 ng/mL
Vẽ đường chuẩn với phần trăm hấp thụ của các dung dịch chuẩn và giá trị bán logarit của các dung dịch chuẩn MQCA (ng/mL) lần lượt là trục Y và trục X.Đọc nồng độ tương ứng của mẫu từ đường chuẩn bằng cách kết hợp phần trăm hấp thụ của nó vào đường chuẩn.Giá trị thu được sau đó được nhân với độ pha loãng tương ứng, do đó cuối cùng thu được nồng độ MQCA trong mẫu.
Sử dụng phần mềm phân tích chuyên nghiệp của bộ công cụ này sẽ thuận tiện hơn cho việc phân tích chính xác và nhanh chóng một lượng lớn mẫu.(Vui lòng liên hệ với chúng tôi để có phần mềm này)

 

8. Biện pháp phòng ngừa

1. Nhiệt độ phòng dưới 25 ℃ hoặc nhiệt độ của thuốc thử và mẫu không được đưa về nhiệt độ phòng (20-25 ℃) sẽ dẫn đến giá trị OD tiêu chuẩn thấp hơn
2. Độ khô của tấm vi mạch trong quá trình rửa sẽ đi kèm với các tình huống bao gồm các đường cong chuẩn phi tuyến tính và khả năng lặp lại không mong muốn
3. Trộn đều mọi thuốc thử và hỗn hợp phản ứng và rửa kỹ tấm vi mạch, nếu không sẽ có khả năng lặp lại không mong muốn
4. Dung dịch dừng là dung dịch axit sunfuric 2 M, tránh tiếp xúc với da;
5. Đặt tấm vi bản chưa sử dụng vào túi tự động niêm phong để niêm phong lại.Chất chuẩn và chất tạo màu không màu nhạy cảm với ánh sáng và do đó chúng không thể tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng
6. Không sử dụng bộ dụng cụ quá hạn sử dụng.Việc sử dụng thuốc thử pha loãng hoặc tạp nhiễm từ bộ dụng cụ sẽ dẫn đến những thay đổi về độ nhạy và giá trị OD phát hiện.Không trao đổi thuốc thử từ các bộ dụng cụ có số lô khác nhau để sử dụng
7. Loại bỏ dung dịch tạo màu với bất kỳ màu nào cho thấy sự thoái hóa của dung dịch này.Giá trị phát hiện của dung dịch chuẩn 0 nhỏ hơn 0,5 cho thấy sự thoái hóa của nó
8. Nhiệt độ phản ứng tối ưu là 25 ℃ và nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp sẽ dẫn đến những thay đổi về độ nhạy phát hiện và giá trị OD.

 

9. Bảo quản và hạn sử dụng

Bảo quản: bảo quản ở nhiệt độ 2-8℃, không đông lạnh.
Hạn sử dụng: 12 tháng;ngày sản xuất có trên hộp.
Lưu ý: Nếu gói hút chân không của tấm vi mạch bị rò rỉ, nó vẫn còn giá trị sử dụng, không ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm, hãy thoải mái sử dụng.

 

 

 

 

 

Q1: Khi nào nó sẽ được vận chuyển?
A1: Chúng tôi sẽ gửi hàng cho bạn càng sớm càng tốt trong vòng 7 ngày làm việc sau khi nhận được khoản thanh toán.(Trong trường hợp các yếu tố bên ngoài như dịch bệnh, việc giao hàng có thể bị trì hoãn)

 

Q2: Nó có hỗ trợ OEM/ODM không?
A2: Nó có thể được hỗ trợ, nhưng số lượng cụ thể cần phải hơn 100.000 chiếc, thuận tiện cho các sản phẩm tùy chỉnh.

 

Câu 3: Nhà máy của bạn hoạt động như thế nào về mặt kiểm soát chất lượng?
A3: Chúng tôi đã được chứng nhận quốc gia ISO9001 và ISO13485.Quy trình sản xuất của chúng tôi tuân thủ quy trình chuẩn nhằm đảm bảo chất lượng sản phẩm tối ưu.

 

Q4: Làm thế nào để cung cấp dịch vụ sau bán hàng?
A4: Chúng tôi cung cấp dịch vụ hậu mãi kỹ thuật trực tuyến chuyên nghiệp.Chúng tôi có thể cung cấp cho bạn hướng dẫn trực tiếp qua video, điện thoại, v.v.

 

Q5: Phương thức thanh toán là gì?
A5: Chúng tôi nhận thanh toán bằng T/T.

 

Q6: Làm thế nào để vận chuyển?
A6: Chọn phương thức vận chuyển tốt nhất cho bạn bằng cách nhận báo giá từ nhiều hãng vận chuyển hợp tác của chúng tôi và cũng vận chuyển theo yêu cầu của bạn.